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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務
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| 先生： |
外泌體分離提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速離心法；
適用于細胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品；
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法；
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品；
3、超濾提取法；
適用于細菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法，做進一步的提取。
外泌體是細胞外囊泡的一種，其膜來源與粒徑范圍與細胞外囊泡相似，胞外囊泡透射電鏡測試服務，電鏡下，顯示出典型的茶托狀超微結構。實際操作中，通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標記物等多方面的鑒定。具體方法包括：透射電鏡（形態(tài)鑒定）、NTA檢測（粒徑及濃度鑒定）、WB（分子標志物）。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一，可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好，純度較高的外泌體樣品，粒徑分布在30-150nm，原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量，對每一個樣品，都會進行3次技術重復。檢測周期為2-3個工作日，可當天到樣當天出結果。
外泌體的提取方式：
1、離心法：此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足。
2、過濾離心：這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣純度不足。
3、密度梯度離心法：用此種方法分離到的外泌體純度較高，但是前期準備工作繁雜
4、免1疫磁珠法：這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單，但生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性。
5、色譜法：此種方法分離出的外泌體大小均一，但設備特殊，應用不廣泛。
透射電鏡作為鑒定外泌體的金標準，一直是科銳諾生物主營的業(yè)務之一。透射電鏡點分辨率可以達到0.1nm，非常適合用來觀察外泌體類囊泡?？蛻糁恍枰乃托迈r或者凍存的外泌體樣品，我們負責從制片到觀察的全套檢測服務。一個樣品提供2個放大倍數(shù)，10-15張照片。檢測周期為7個工作日。
在透射電鏡基礎上，用外泌體標記蛋白對外泌體進行免1疫標記，利用膠體金標記出外泌體表面的特定抗原的位置。結合透射電鏡形態(tài)學定性的特點，同時確定外泌體標記蛋白的位置。這樣同時從形態(tài)學及免1疫學原理上驗證外泌體。這樣數(shù)據(jù)結果中既可以獲得經(jīng)典形態(tài)的外泌體，又可以定性及定位外泌體表面的標志蛋白。這樣具有更充分的說服力。
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第4年
