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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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熒光原位雜交技（fish）原理：是利用熒光標記的特異核酸探針與細胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子或RNA分子雜交，通過在熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描儀下觀察熒光信號，來確定與特異探針雜交后被染色的細胞或細胞器的形態(tài)和分布，或者是結(jié)合了熒光探針的DNA區(qū)域或RNA分子在染色體或其他細胞器中的定位。
熒光原位雜交技（fish）實驗步驟：
1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。
2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。
3、切片：石蠟經(jīng)切片機切片，攤片機撈片，62°烤箱烤片2h。
4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min，水稻RNA原位雜交檢測服務(wù)，風干，DEPC水浸泡。
5、消化：根據(jù)組織固定時間長短，切片于修復(fù)液中煮沸10分鐘，自然冷卻。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標記的已知堿基序列的核酸探針，依據(jù)堿基互補配對原理，與中期染色體玻片標本中的同源 DNA 序列進行雜交。
標記可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后進行放1射自顯影；也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛，再用熒光顯微鏡進行觀察，即熒光原位雜交（fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH）技術(shù)。
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第4年
